发布时间:2022-10-28 15:42:16
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【关键词】 水飞蓟素 肾小管间质纤维化 肾小管上皮-间质转分化 转化生长因子-β1
【Abstract】 Objective To explore the effect of silymarin on epithelial-mesenchymal transition (EMT) in rats with tubulointerstitial fibrosis induced unilateral ureteral obstruction. Methods 56 Sprague-Dawley rats were randomly pided into three groups: operated group(n=24), silymarin treated group(n=24)and sham-operated group(n=8).Renal tubulointerstitial fibrosis model was established via unilateral ureteral obstruction(UUO). In operated group and treated group, eight rats were killed at the 7d, 14d and 21d after operation to examine the histological changes of renal tissue, but all 8 rats in sham-operated group were only killed at 21d. Histological changes were observed in tubulointerstitial injury under microscope.The expression of transforming growth factor- beta1(TGF-β1)and α-smooth muscle action(α-SMA) in renal tissue were determined with immunohistochemical method, respectively. Results Renal interstitium injury was seen in operated group and treated group at day 7,and became aggravating after day 7. The degree of renal tubulointerstitial fibrosis in rats from treated group was lighter than that of operated group at day 7, 14, 21(P
【Key words】 Silymarin tubulointerstitial fibrosis epithelial- mesenchymal transition transforming growth factor- beta1
肾小管上皮损伤引起小管上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)在肾间质纤维化进程中发挥重要作用。这个过程受许多因素影响,其发展机制涉及许多方面。近年来研究表明转化生长因子-β1(TGF -β1)在EMT进程中具有重要的促进作用[1]。本文旨在探讨应用水飞蓟素能否防止肾小管间质纤维化及可能机制。现报道如下:
1 材料与方法
1.1 动物模型及分组
选用3月龄SD大鼠56只,体重200~250g,购自新乡医学院动物中心。大鼠适应环境1周后,随机分为:梗阻组(24只)、治疗组(24只)、假手术组(8只)。大鼠行氯胺酮50mg/kg麻醉,取左旁正中切口剪开腹壁,以4号手术线将左输尿管近端两处结扎。假手术组同样处理但不结扎。其中治疗组于术前30分钟开始给予水飞蓟素30mg/kg灌胃,每日一次;假手术组和梗阻组给予等量生理盐水灌胃处理。UUO大鼠于术后第7天、14天、21天随机收获8只,假手术组于第21天一次处死。取肾脏,10%多聚甲醛固定。光镜下观察肾组织的病理变化和免疫组织化学法检测肾脏TGF-β1及α-SMA的表达情况。实验过程中梗阻组第14天、21天时间点各死亡大鼠1只。
1.2 肾脏组织病理
肾组织切片进行HE染色和Masson染色,光镜下观察。在IDA-2000高清晰度数码纤维图像分析系统下计算肾小管间质纤维化相对面积。高倍镜(×200)下每张切片随机选取10个不重叠视野测定小管间质纤维化面积与同视野小管间质总面积的百分比,进行半定量评分[2],取其平均积分为每张切片评分。评分标准:0分:无病变;1分:50%。
1.3 免疫组化
采用SABC法检测肾组织中的TGF-β1和α-SMA,操作步骤按SABC试剂盒说明书进行。光镜下组织切片呈棕黄色颗粒性沉积区域为阳性染色部位。高倍镜(×200)下在每张不包含肾小球和血管的肾小管间质区域随机选取10个不重叠的视野,应用IDA-2000高清晰度数码图像分析系统进行图像采集,经灰度变换将阳性染色区域面积与该视野总面积百分比,计算平均值作为该样本的百分比值。
1.4 统计学处理
各组数据均采用均数±标准差(
)表达,组间差异采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验法。由SPSS11.5统计软件进行统计学处理。
2 结果
2.1 肾脏组织病理改变
光镜下假手术组大鼠肾组织无病理改变。UUO术后梗阻组和治疗组大鼠肾脏病理改变均明显加重趋势。实验第7天时,梗阻组和治疗组大鼠肾间质大量炎症细胞浸润、水肿,肾小管明显扩张,部分小管内见大量细胞管型,肾小管上皮细胞胞浆疏松、浊肿和空泡变性。14天时,2组大鼠肾间质弥漫性炎症细胞浸润,间质面积进一步增宽,肾小管明显扩张,部分小管内仍见大量细胞管型,肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性,间质出现轻度纤维化。21天时,2组病变继续加重,肾间质炎细胞浸润减少,大部分肾小管脱落坏死、萎缩、消失,残余肾小管明显扩张,上皮肿胀,空泡变性, 间质纤维化明显。治疗组各观察时间点肾脏病理变化明显较梗阻组减轻(P
2.2 肾组织免疫组化变化
假手术组肾组织微量表达TGF-β1,主要位于肾小球系膜和上皮细胞,小管主要表达于远曲小管;梗阻组和治疗组肾组织表达TGF-β1随病情进展而逐渐增强,遍布皮髄质损伤的肾小管,除肾小管上皮细胞有阳性表达外,增殖的单核巨噬细胞亦有表达。各观察时间点治疗组均较梗阻组减少(P
假手术组以血管作为自身阳性内参照,肾小球、肾小管和间质细胞均未α-SMA表达。UUO大鼠术后第7天时肾间质既有大量表达,14天时表达显著增加,阳性信号弥漫分布,高峰持续至21天实验结束。各观察时间点治疗组肾脏组织均较梗阻组减少(P
2.3 相关性分析 TGF-β1表达量与肾小管间质损伤评分、α-SMA表达量均呈正相关,相关系数r=0.914、0.971,P
3 讨论
单侧输尿管梗阻(UUO)诱导肾小管间质纤维化模型主要造成肾小管损伤,伴有炎症细胞浸润,并在较短时间内发展为小管间质纤维化,是目前研究肾小管间质损伤较理想的模型之一[3]。本文采用UUO大鼠模型中的梗阻肾脏损害以小管间质为主,伴有较多的炎症细胞浸润及进行性纤维化,符合UUO模型的一般特点,表明动物模型的构建是成功的。
水飞蓟素是从水飞蓟植物提取的混合物,是一种黄酮醇类化合物,主要含水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟醇等。水飞蓟素作为一种传统药物广泛用于防治肝脏纤维化。它主要通过下调TGF-β1在肝内的表达,改变肝枯否细胞的功能,抑制炎症反应,有效阻止肝纤维化[4]。目前研究发现肾小管间质纤维化与肝纤维化的机制相同。那么,水飞蓟素是否也能延缓肾小管间质纤维化呢?本实验研究结果显示:同梗阻组相比, 治疗组各观察时间点肾脏病理变化明显减轻,肾小管间质纤维化程度亦减轻。提示水飞蓟素可有效减轻肾小管间质纤维化。
肾小管间质纤维化(TIF)几乎是所有慢性肾脏疾病进行性发展的共同通路,是导致终末期肾病(ESRD)的主要病理基础[5]。肾小管间质纤维化确切机制目前尚不清楚,其中一个重要机制就是肌成纤维细胞(Myof)增多及活化。Myof 是间质中合成细胞外基质(ECM)的主要细胞,而细胞外基质的增多直接导致了TIF的进行性发展。目前Myof的来源还不完全明确,近年研究发现除了由成纤维细胞活化而来,还有相当一部分来源于肾小管上皮细胞[6],有学者报告在肾纤维化的发生过程中,36%的新增纤维细胞来源于肾小管上皮细胞转分化[7]。α-SMA是MyoF的重要标志,可以用来观测肾脏损伤时间质纤维化的病理进程[8]。本实验研究发现,假手术组α-SMA仅表达于血管平滑肌肌层,UUO各组大鼠肾组织表达的α-SMA随病情进展而持续升高。梗阻组明显高于治疗组(P
参 考 文 献
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1 非现场审计的作用及特点
(1) 提高了审计及时性。非现场审计借助计算机和网络系统,可以实时获取业务系统有效的数据信息,通过设置预警标准能够做到实时动态监测,实现对风险的早期控制,为管理层提供预警信号。为现场审计提供资料和线索,最大限度地提高审计工作的效率和质量,为领导决策提供支持。
(2) 拓宽了审计覆盖面。建设银行近年来资产规模增长迅速,新的金融产品和服务不断推出,业务的复杂程度大大提高,使审计的复杂程度也相应提高,审覆盖面广度加大。在现有审计资源的条件下,单纯依靠传统的审计方式和手工作业模式难以保障审计监督所必须达到的广度和深度。而非现场审计依托高科技手段,可以远程调集所属机构的有关业务数据并进行监测,有助于全面把握分支机构和各项业务的风险状况。
(3) 降低审计成本,提高审计质量和效率。一是节约审计成本。非现场审计模式下,审计组除了必要的现场调查和现场沟通外,可以大大减少审计人力费用、差旅费用和时间费用。二是减少了调阅资料时间。非现场审计模式下,审计数据的采集主要通过固定的审计数据采集接口来获得,避免了现场审计中依赖被审计单位提供数据,使内部审计具有前所未有的主动性和灵活性。三是提高审计效率,增加审计价值。非现场审计是从定量分析到定性分析的过程,分析性复核方法贯穿于非现场审计的全过程,增强了审计人员的理性思维,可以避免重复劳动和无效劳动,规避审计风险,提高审计质量,使现场审计更具针对性,并且可以有效地解决审计资源不足与审计任务繁重的矛盾。
2 目前商业银行开展非现场审计存在的问题
目前,商业银行内部审计方式仍然是以现场审计为主,而非现场审计的手段没有得到充分的发挥,不能满足业务发展的需要。信息化、网络化和专业技术化程度依然偏低,非现场审计发展存在一些薄弱环节,主要表现在:
(1) 未建立起一套科学、完整的非现场审计管理办法和操作规程。进一步推动非现场审计工作尚未进入系统性规划阶段,如在非现场审计发展推动模式上缺少完整的规划、目标和具体措施;非现场审计推进缺少组织保障,没有明确的职责分工,缺少科学的领导、决策和协调;非现场审计的制度规章、操作流程尚属空白。
(2) 熟悉非现场审计技术的人员严重不足,致使非现场技术应用程度不高。非现场审计系统对使用人员的综合素质要求较高(操作处于半编程状态),全面系统掌握非现场审计技术的人员匮乏,仅有少数审计人员熟悉数据源结构,系统操作熟练,能够编制审计模型,这些同志一般都有较深的技术背景(原科技人员)。大多数的审计专业人员尚不能熟练运用非现场审计技术。非现场审计技术本应是全体审计人员的必备工具,仅有少数人掌握,有违引进非现场审计技术的初衷。
(3) 非现场审计仅作为现场审计的辅助手段,仍然是在非现场审计分析初步筛选疑点的基础上确定抽样样本后到现场查证确认的模式。非现场审计技术应用未能有效减少审计项目所需的审计资源量,同时,大量的现场审计作业也势必对业务经营造成不利的影响。
3 商业银行如何有效拓展非现场审计的途径
(1) 健全管理制度,落实发展目标。提高认识,落实发展目标,制定整体规划,建立健全非现场审计制度,保证非现场审计有章可循,保证数据的收集、加工、分析、报告和处理有条不紊,保证所有的现场审计建立在非现场审计的基础上。
【摘要】 目的: 观察Smad6和Smad7基因能否抑制TGFβ诱导肾小管上皮间充质转分化。方法: 构建产生表达Smad6和Smad7基因的无辅毒腺相关病毒载体, 再将病毒颗粒分别转染入人肾小管上皮细胞(HKC), 细胞随机分为正常对照、 TGFβ1组、 Smad7 组、 LacZ组、 TGFβ1+Smad7或Smad6组、 TGFβ1+LacZ组。10 μg/L TGFβ1添加入培养液孵育15、 30、 60、 120 min和3 d。Western blot测定TGFβ1和Smad6或Smad7基因转染对细胞pSmad2、 Ecadherin、 αsmooth muscle actin(αSMA)表达的影响, ELISA法测定培养上清羟脯氨酸的含量的变化, 倒置显微镜观察细胞形态变化。结果: 与未加TGFβ1细胞相比, 添加TGFβ1后15、 30、 60、 120 min胞内Smad2磷酸化水平明显增加, 30 min时表现最大。10 μg/L TGFβ1与HKC孵育72 h后, 细胞αSMA和羟脯氨酸量合成增加, Ecadherin表达减少; 细胞形态变长, 呈纺锤状细胞, 失去鹅卵石样的形状。Smad7基因转染可抑制TGFβ1诱导Smad2磷酸化, 抑制细胞αSMA和羟脯氨酸合成, 增加Ecadherin表达, 维持培养细胞的上皮样形态, 相反, Smad6没有这样的作用。结论: Smad7而不是Smad6基因转染能抑制TGFβ1诱导肾小管上皮间充质转分化, 这些作用可能与Smad7阻断Smad2磷酸化有关。
【关键词】 Smad7; Smad6; 上皮间充质转分化; TGFβ; 基因治疗
肾小管上皮间充质转分化(epithelial mesenchymal transition, EMT)是肾小管间质纤维化(Tubulointerstitial fibrosis, TIF)发生的重要原因之一, 超过1/3的间质成纤维细胞来源于EMT, 因此, 寻找减缓EMT的方法是TIF研究的重点[1, 2]。TGFβ是EMT的重要诱导剂之一, 减少其对小管上皮的影响可能对TIF治疗有帮助。Smad6和Smad7蛋白是TGFβ家族细胞内信号转导的负调控蛋白(InhibitorySmads, ISmad)[3]。ISmads能与活化的TGFβⅠ型受体牢固结合, 阻止Smad2和Smad3磷酸化, 未磷酸化的Smad2和Smad3不能形成转录复合物进入核内, 从而阻断了TGFβ对靶基因的转录。我们以往的研究发现Smad6和Smad7表达下调可能是TGFβ 高表达致TIF的主要原因, 但提高它们的表达能否抑制TGFβ诱导的EMT尚不清楚[4]。为此, 我们采用腺相关病毒将Smad6和Smad7基因分别转染入人肾小管细胞中, 观察其能否抑制TGFβ诱导的EMT, 并分析其细胞内信号转导机制。
1 材料和方法
1.1 材料 限制性核酸内切酶BamH I、 Xho I及T4连接酶, 均购自TaKaRa公司。Wizard PlusSV Minipreps DNA Purification System和Wizard PureFectionPlasmid DNA Purification System质粒提取试剂盒和胶回收试剂盒, 均购自Promega公司。TGFβ1和兔抗Flag M2抗体购自Sigma公司, 兔抗phosphoSmad2抗体购自upstate biotechnology公司, 兔抗αSMA抗体购自Dako公司, 兔抗Ecadherin抗体购自B&D公司。AAV HelperFree System(pAAVMCS vector、 pAAVLacZ vector、 pAAVRC plasmid、 pHelper plasmid)和XL10Gold感受态细菌, 购自Stratagene公司。E.coli DH5α由本校分子遗传教研室馈赠。含全长Smad6/Flag和Smad7/Flag融合基因表达质粒, 由瑞典Serhiy Souchelnytskyi博士惠赠。HEK 293和HKC细胞购自美国ATCC。
1.2 方法
1.2.1 Smad6和Smad7 AAV的产生及鉴定 首先将Smad6/Flag和Smad7/Fla段从质粒pcDNA3中用EcoR I/BamH I双酶切出, 再克隆到pAAVMCS vector质粒的多克隆位点, 正式命名为pAAVSmad6/Flag和pAAVSmad7/Flag质粒。按Stratagene公司AAV HelperFree System转染试剂盒以磷酸钙沉淀的方法产生Smad6和Smad7 AAV。以1 mL病毒储存液感染HKC细胞48 h后表达转移基因阳性细胞数(SABC组化)来计算。
1.2.2 HKC细胞的培养及实验分组 HKC细胞用含100 mL/L的胎牛血清, 100 U/mL青霉素、 100 mg/L链霉素的RPMI1640培养液传代培养, 培养条件为37℃、 50 mL/L CO2。细胞随机分为正常对照、 TGFβ1组、 Smad7 组、 LacZ组、 TGFβ1+Smad7或Smad6组、 TGFβ1+LacZ组。实验分三步骤进行, 第一步观察10 μg/L TGFβ1对HKC细胞磷酸化Smad2水平的影响, 时相点设为0、 15、 30、 60、 120 min; 第二步观察不同AAV滴度ISmad转染HKC对TGFβ1诱导上皮间充质转分化的影响, 时相点为72 h。
1.2.3 Western bot 分析 细胞经PBS冲洗后, 加入RIPA裂解液(10 g/L Nonidet P40, 50 mmol/L TrisHCl, 150 mmol/L NaCl, 2 mmol/L EDTA, 1 mL/L SDS, 10 mL/L TritonX100, PMSF 50 mg/L, Leuptin 5 mg/L)30 min匀浆提取蛋白, 4℃ 12 000 g离心20 min, 取上清以Micro BCA protein Kit 测定蛋白质含量。取等量蛋白质经煮沸5 min后行SDSPAGE垂直凝胶电泳, 电转移蛋白质到PVDF膜上, 膜在50 mL/L牛血清白蛋白TBST液(10 mmol/L Tris·HCl, 150 mmol/L NaCI, 0.5 mL/L Tween20, pH8.0)封闭, 37℃室温1 h, TBST洗膜后分别与不同一抗AntiphosphoSmad2(1∶1 000)、 Ecadherin(1∶1 000), αsmooth muscle actin(1∶1 000)、 β actin(1∶1 000)抗体孵育37℃, 2 h, 依次再用生物素标记的二抗杂交和辣根酶标记链酶卵白素液孵育, 37℃, 1 h, TBST洗膜后在暗室中加ECL发光试剂, X光胶片下曝光, 常规方法显影、 定影, 直至显影出电泳带。使用Bio Rad 5000图像系统采集电泳图像, Verso Doc软件检测蛋白质条带的吸光度(A)值, 以β actin为内参照进行半定量分析。
1.2.4 培养上清中羟脯氨酸的含量 严格按试剂盒说明书方法操作, 用M550型酶标仪在550 nm处检测A值, 通过下列公式计算样品中羟脯氨酸含量。样品中羟脯氨酸浓度(mg/L)=(测定管A值-空白管A值)/(标准管A值-空白管A值)。
1.2.5 培养细胞形态的变化 观察正常对照组, TGFβ1组, TGFβ1+Smad7组, TGFβ1+Smad7组细胞的形态变化。
1.2.6 统计学分析 实验数据以x±s表示, 用SPSS13.0统计软件进行组间方差分析, P
2 结果
2.1 重组AAV的产生及病毒滴度 分别取10 μg的质粒pAAVLacZ或pAAVSmad6/Flag或pAAVSmad7/Flag和各10 μg的 pAAVRC和pHelper质粒经磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞后2~3 d。pAAVLacZ转染组经原位βGalactosidase 染色细胞后可见细胞呈蓝色。转染Smad6和Smad7 AAV的细胞, 约90%以上的肾小管上皮细胞可有效表达Smad6和Smad7蛋白, 染色后可见阳性细胞呈棕色。平均病毒病毒滴度分别为rAAVlacZ 2×1010 IU/mL, pAAVSmad6/Flag 3×1010 IU/mL, pAAV Smad7/Flag 3×1010IU/mL(图1)。
2.2 TGFβ1和ISmad基因转染对pSmad2的表达的影响 Western blot结果显示, HKC细胞和TGFβ1孵育0、 15、 30、 60、 120 min后, 细胞pSmad2水平增加, 其作用在30~60 min时表现最大, 表明TGFβ1可诱导细胞内Smad2磷酸化(图2)。
1×1010滴度Smad7基因转染HKC后30 min, Western blot结果显示Smad7基因转染可抑制TGFβ1诱导的Smad2磷酸化水平, 而Smad6基因转染不能抑制TGFβ1诱导的Smad2磷酸化(图3、 4)。
2.3 ISmad基因转染对TGFβ诱导肾小管上皮间充质转分化的影响 Western结果显示, 10 μg/L TGFβ1处理HKC细胞后72 h, 与正常对照组相比, 细胞αSMA表达增加, 而Ecadherin表达减少。与TGFβ1组相比, TGFβ1+Smad7组细胞αSMA减少, Ecadherin表达明显增加。TGFβ1+Smad6组αSMA、 Ecadherin表达均无明显变化, 表明Smad7基因转染可拮抗TGFβ1诱导肾小管上皮间充质转分化, 而Smad6没有这样的作用(图5~8)。
2.4 ISmad基因转染对培养上清中羟脯氨酸的含量的影响 ELISA结果显示, 10 μg/L TGFβ1处理HKC细胞后72 h, 与正常对照组(3.37±0.41)mg/L相比, 细胞培养上清中羟脯氨酸的含量(6.12±0.55) mg/L明显增加。与TGFβ1组相比, TGFβ1+Smad7组细胞上清羟脯氨酸的含量(4.15±0.46)mg/L明显降低, 而Smad6组(6.15±0.56)mg/L无明显变化, 表明Smad7基因转染可拮抗TGFβ1诱导肾小管羟脯氨酸的合成, 而Smad6没有这样的作用。
2.5 培养细胞形态的变化 10 μg/L TGFβ1作用72 h后细胞形态变长, 呈纺锤状细胞, 失去鹅卵石样的形状, 表明肾小管细胞向肌纤维细胞形状转变。与TGFβ1组相比, TGFβ1+Smad7组细胞能维持上皮样形态, 而TGFβ1+Smad6组细胞不能维持上皮样形态, 呈纺锤状细胞(图9)。
3 讨论
TIF是各种肾脏疾病进展至肾衰竭的共同通路, 减缓TIF的进展一直是慢性肾病治疗的重点之一[5]。TIF主要表现为小管细胞消失和间质细胞外基质(ECM)的堆积。ECM主要由纤维连接蛋白和胶原蛋白组成。尽管肾小管细胞能合成部分ECM, 但肌成纤维细胞是ECM的主要来源。研究表明, 肌成纤维细胞的来源可能有: ①肾间质固有成纤维细胞; ②肾髓源性干细胞; ③EMT, 其中EMT是肾脏纤维化中肌成纤维细胞的主要来源, Iwano等[2]报道大约36%的肌成纤维细胞来源于肾脏局部EMT。因此, 探讨EMT成因和阻断措施对减缓TIF的进展具有重要意义。本研究结果显示, HKC细胞和TGFβ1孵育0、 15、 30、 60、 120 min后, 细胞pSmad2水平增加, 说明TGFβ通过Smad2的磷酸化实现其胞内信号转导。Smads蛋白是TGFβ细胞内的主要信号转导蛋白, TGFβ首先与其II型受体结合, 活化的II型受体蛋白激酶使I型受体磷酸化, 活化的I型受体蛋白激酶作用于Rsmads(Smad2, 3), 使其磷酸化, 随后Smad2, 3与4形成异源寡聚体复合物, 移入核内, 在核内其与目的基因启动子区的Smads反应元件结合, 启动基因转录, 包括胶原基因、 ISmad基因等。Ellis等[6]发现I, III 和V胶原基因均含有Smad2, 3, 4的结合位点。PAI1基因启动子740和647位点存在有TGFβ反应元件, 活化的Smad形成的转录复合物与此元件结合后, 可增强PAI1基因的转录[7], 由此影响纤溶酶原/纤溶酶的活性。Hu等[8]还证实alphaSMA基因的启动子中含有二个Smad3反应区, Smad3可促进αSMA的表达, 因此阻抑受体活化的Smad(Smad2, 3)磷酸化, 是减弱TGFβ信号, 控制EMT的关键。Smad6和Smad7蛋白是TGFβ家族细胞内信号转导的负调控蛋白。TGFβ活化I型受体同时也激活ISmad, Smad7通过与Smad2和Smad3竞争性结合I型受体, 抑制其磷酸化并干预核内功能性SmadDNA的形成[9]; 另一方面Smad7还可与smurfl/2结合, 通过泛素化途径降解I型受体, 对TGFβ细胞内信号转导进行负反馈调节[10]。Smad6主要负调控蛋白骨形态发生蛋白(BMP)和部分TGFβ的细胞内信号转导[11]。既往我们建立单侧输尿管梗阻性肾病肾小管间质纤维化模型, 发现Smad6和Smad7表达下调可能是TGFβ 高表达致TIF的主要原因, 但提高它们的表达能否抑制TGFβ诱导的EMT尚不清楚。本研究结果显示, Smad7基因转染可抑制TGFβ1诱导Smad2磷酸化, 而Smad6基因转染不能抑制TGFβ1诱导的Smad2磷酸化, 说明Smad2磷酸化只受Smad7调控。Smad6不具有这样的作用, 我们分析这可能与Smad6主要影响Smad1和Smad5的磷酸化[12], 参与调控BMP信号通路作用有关。Zhao等[13]发现Smad7而不是Smad6可抑制TGFβ诱导的胚胎肺的形态发生; HillKapturczak等[14]还证实Smad7而不是Smad6可抑制TGFβ对肾小管细胞血红素加氧酶的抑制.因此, 控制Smad2的活化可能是Smad7减弱TGFβ信号的分子机制基础。
从ECM产生这个角度来看, 激活产生ECM的效应细胞被认为是肾脏纤维化的核心。研究已经揭示肌成纤维细胞是ECM的主要来源, 肾脏纤维化中肌成纤维细胞的主要来源于EMT[2, 5]。肾小管发生EMT时主要表现以下特点: ①细胞极性消失; ②细胞Ecadherin表达受抑制和紧密连接消失; ③表达波形纤维蛋白; ④表达αSMA。其中Ecadherin是上皮细胞的标记分子, 对维持上皮细胞间紧密连接, 稳定上皮细胞表型具有重要的作用, αSMA是MFB的标记分子[15]。倒置显微镜观察10 μg/L TGFβ1作用72 h后细胞形态变长, 呈纺锤状细胞, 失去鹅卵石样的形状, 表明肾小管细胞向纤维细胞形状转变。Smad7基因转染可抑制TGFβ1诱导的Ecadherin表达下降和αSMA表达增加, 降低培养上清中羟脯氨酸的含量, HKC能维持上皮样形态, 向纤维细胞形状转变不明显, 而Smad6转染组不具有这样的作用, 说明Smad7基因转染可抑制TGFβ诱导的肾小管上皮细胞转分化, 从而减少肌成纤维细胞的数目, 最终减轻肾小管间质纤维化。
总之, Smad7基因转染可抑制TGFβ诱导的肾小管细胞上皮-间充质的转分化, 其作用途径可能是通过抑制Smad2磷酸化, 干预下游Smad介导的细胞内信号转导, 维持Ecadherin表达, 减少αSMA表达, 降低细胞合成ECM蛋白有关, 而Smad6基因转染不具有这样的作用。
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身高:160cm
之前体重:112斤
目前体重:98斤
减重历时:30天
马拉松式的8年恋爱终于有了功德圆满的结果:2007年10月5号,我,不漂亮也不难看的傻女孩Elle就要嫁给马志刚了!
从确定婚期那天开始,我便紧绷神经,全力以赴地应对婚期的大小琐事,布置新房、挑选礼服与喜帖……忙得不亦乐乎。
还记得那天和志刚去试礼服,我相中了一件鱼尾式白色纱裙,穿上后在镜子前左右环顾,镜中的自己仿若童话中美丽的人鱼公主。回头期待地看向志刚,等待着他的赞美。“嗯,好看!”我的心有点飘飘然,但谁知他又补了一句:“不过,要是能再瘦点就好了。”立时,我沮丧到极点。我知道志刚这么说是无意的,但还是深深地刺痛了我,从那一刻开始我痛下决心,一定要在婚前减掉身上多余的肉肉,让穿上漂亮婚纱的自己成为志刚最引以为豪的美丽新娘。
8月26日,我开始了自己的目标型减肥计划。
离婚期还有近10天,我的减肥计划正好满一个月,站在体重称上看着指针稳稳地停在49kg处,我的欣喜难以言表,一个月来减肥的辛苦与忍耐都在这一刻化为乌有,我甚至能够想象得出,在甩掉了身上足足14斤赘肉之后,再穿上那件漂亮的鱼尾式婚纱的自己会是多么的婀娜。
幸福是要与朋友一起分享的,因此,我首先想到与我一样艰难行走在减肥路上的姐妹。我要将自己成功减肥的心得告诉她们,让她们也能和我一样实现瘦身梦想。
总结这一个月的减肥经历,我觉得有3点至关重要,有兴趣就听我慢慢说吧。
减肥关键1:饮食――少食多餐,均衡饮食
我曾经有过几次减肥经历,其中也有靠节食的,但由于克制力不够,虽然体重有所减少,但很不稳定,多吃一点就会反弹;而且那段时间的体质很不好,脸色暗黄暗黄的,给人一副病怏怏的感觉。
减肥就是为了美,如果为“纤瘦美”而丢了“健康美”,岂不和扳苞谷的猴子没什么两样?这样一想,我便决定放弃。不过,那次经历给了我一些提醒,让我在开始这次减肥之前就对自己的饮食做了调整。
清晨:空腹喝一杯白开水或清水。
早餐:中式早餐以营养的汤、米饭、青菜为主,外加鸡肉或鱼肉;西式的则以全麦面包、脱脂牛奶、煎蛋(但不放盐)为主,配以苹果或西红柿等。如此丰盛却完全不用担心致胖,唯一需注意的就是要保证一次食量不能太多,以免把胃撑大。
加餐:一般在10~11点之间,主要是吃水果,比如1个苹果或桃子、香蕉等。我个人认为减肥期间营养一定要均衡,而且上午吃东西,身体吸收和消化能力都很强,新陈代谢速度快,不会囤积脂肪。
午餐:米饭和青菜。保持健康原则,吃饱但绝不吃撑。若在饭前半小时喝1大杯白开水,可避免午餐吃过量。
下午茶:一般1点上班时我会喝1杯浓浓的普洱茶,去脂兼提神;3点时我会喝1杯酸奶,健康养颜且利于消化,是不可或缺的下午茶;考虑到减肥的同时很可能会让胸部也缩水,因此每天下午我还会喝1杯木瓜饮料,具体喝的时间不固定,但一定要在5点之前,以免多余热量无法及时得到消耗。
晚餐:我一般很少吃。但如果要去健身,去之前我会喝1杯酸奶,再吃1个西红柿或1根黄瓜,回来后我则会喝一些清淡的蔬菜汤。其实,晚餐的原则就是――吃得越早、越少会越好。谨记这一原则,并尽力遵守,你就会看到回报。
Point:想健康就要多喝水,但这一理论只适合白天。把人体1天所需的2~3升水全放在白天摄入,晚上8点之后就尽量不要喝水,要知道晚上喝太多水会导致身体浮肿,从而影响减重效果。
减肥关键2:运动――坚持就是胜利
我选择去健身房做专业且有针对性的运动,以充分锻炼全身每一个部位,如此瘦下来会比较均匀、有型。此外,健身房充满激情的群体运动氛围,能充分带动人的运动兴致,令人很轻松地燃烧掉更多脂肪。
狠下心花钱――
我先在一家条件不错的健身中心办了张年卡,费用总计4800元,之后又给自己买了套将近1000元的健身服,总计差不多是我年收入的1/10,对我来说算是大出血了,这么做只是希望代价不菲的健身卡和健身服能督促我坚持运动。听朋友说,在昂贵的运动场所若自己不能坚持就会为花掉的钱倍感心疼,以此来达到运动目的。听说这种方法百试不爽,再懒的女生都会坚持,总之我自己就是因心疼花掉的钱才坚持下来的,哈哈。
健身房甩脂先苦后甜――
每周我会去健身房3次,以快走和器械练习为主。
快走:我个人认为它是一项非常好且容易坚持下来运动。如果换成跑步,对我来说就有些难度,而且像跑步这种过于激烈的运动若一次持续过长时间,会对膝关节和脚踝造成强烈的冲击。
每次快走我会坚持60~75分钟,而为加大运动量以及增添乐趣,我会选择性地变换快走节奏,前10~15分钟以5公里/小时的速度走,接下来的15~20分钟以6公里/小时的速度走,之后的20~30分钟以6.5~7公里/小时的速度走,最后的10~15分钟步率逐渐降低,以约4.5公里/小时的速度走,这样有急有缓,运动起来不会觉得太累。此外,如果你喜欢跳舞,快走时还可踩着健身房里舞曲的鼓点,优美的身姿可会为你赢来不少帅哥的瞩目。
器械练习:这种练习主要是针对手臂、腹部、腿部和臀部等重点部位,相对来说比较专业,运动时最好请健身教练有指对性地为你设计最佳的练习方式。我个人感觉,器械练习重量越轻越好,只要做的次数多一些就可以了。
跳操:这其实是最适合女性减肥的好运动,不过由于我去的那家健身房跳操班的人实在太多,我又天生不爱凑热闹,便只好放弃。
Point:不管选择什么运动项目,最后都要做足拉伸运动,再做一定时间的按摩,尤其是腿部,它能帮助你保持优美的身体线条。
减肥关键3:心态――减肥是生活中最自然的一部分
“胖”不仅意味着体内污物排出不彻底、新陈代谢缓慢,同时还会给人以倦怠不精神的印象。年轻的身体应该是健康且充满活力的,因此,选择减肥不仅是一种积极面对生活的态度,更是追求健康与青春的本能需要。它不是否定原来的自己,而是要让原来的自己更加完美。
1、坚持跑步。由于饮食不规律,导致身体长胖,想快速减肥。最简单也是最方便的一个方法就是跑步,由于每个人的身体体质不同,可以选择慢跑,也可以选择慢走,快走,总之需要意志坚定,每天去坚持,就会有很明显的效果。
2、每天坚持做仰卧起坐。减肥,是一个很漫长的事,其实也是一步一步的发展的,需要人去坚持,才会有效果。仰卧起坐是最常见的一种锻炼方式,简单有效。我们可以早上起来,或者睡前,饭后一小时,坚持做上几组仰卧起坐,每天能坚持养成锻炼的好习惯,减肥就不是难事了。
3、坚持去健身房。相比较很多散练的运动减肥方法,可能效果不太明显,这时候如果有一定的条件的话,可以选择去专业的健身房,哪里有专业的器材,还有专业的教练,对于你个人的减肥,可以给出很好的计划,能让你快速减肥,达到好的效果。
4、坚持做平板支撑。减肥的方法有很多种,除了仰卧起坐,俯卧撑,平板支撑也是最常见的一种锻炼方法,无需借助其他器材,只需要瑜伽垫,简单方便。刚开始可以设定短一点的时间,后来可以慢慢加长训练的时间,不断地锻炼自己,坚持下去,对减肥一定会有效果。
(来源:文章屋网 )
第1招:像宝宝一样爱玩
宝宝们都喜欢在床上、地板上爬着到处转,当他们爬行时,他们的腹部和背部肌肉在用劲,这些核心肌肉对干训练他们爬行和坐立是非常重要的。妈妈们也要将注意力集中在这些肌肉上。 “训练核心肌肉非常重要,但就像做伸展运动一样。尽管效果不是十分明显,但不要因为这样就忽视它,强壮的核心肌肉可以让你在日常活动中拥有更好的控制力和辅助力。”―位健身房高级私人教练这样说。
这样做同样会使你变得更强壮,以便能参加更多的运动。宝宝在玩耍的时候,妈妈可以学着跟宝宝一起运动,跟宝宝一起玩捉迷藏,也可以自己做些简单的健身操、瑜伽操等等。
第2招:像宝宝一样吃
说到和宝宝一样吃,我们大多数成人也许会不以为然,脑海里浮现的是宝宝吃东西时在头发或者脸上都沾满食物的画面。实际上,像宝宝一样吃饭也是减肥的重要因素。
①像宝宝一样每隔3―4小时吃点小点心,可以使你保持充足的精力。美国体育医学院的学者发现整天都在摄入食物的运动员的脂肪比那些在正统吃饭时间消耗他们所有卡路里的人更少。
②像宝宝一样在饱了以后就停止进食,不管你面前还留对于小妈们来说,有什么比小宝宝胖乎乎的小脸蛋和肉嘟嘟的小胳膊小腿更让人喜欢的呢!然而,对于自己身上的赘肉,妈妈们却苦恼不已。儿科医生说:宝宝开始学会爬行时,它的婴儿肥就开始慢慢减少了。那么,他们的妈妈呢?因为怀孕生产而增力0的体重也会慢慢自然减少吗?――答案是否定的。但,也许我们也可以从宝宝身上学几招减肥秘技:着多少美食――这对于控制食量是非常值得借鉴的。
③像宝宝一样选择多样化的食物。在你的食物里加入给宝宝吃的食物,比如说南瓜、青豆、牛肉、米饭、香蕉和梨等等。参与选择宝宝食谱意味着你摄入了更多的水果和蔬菜,饮食也变得更健康。
第3招:像宝宝一样睡
宝宝的睡眠时间大约在12-15个小时,这个时间对于我们成人来说是非常奢侈的。在你的减肥计划中,充足的睡眠往往可能是被忽略的环节。最近的研究显示:缺乏睡眠会影响人体的荷尔蒙水平,从而增加人体的饥饿感并减慢新陈代谢速度。所以,在你累了或者困了的时候,适当的休息是非常明智的选择。
第4招:像宝宝一样看电视
电视真的对你的宝宝有好处吗?医学研究表明:长时间看电视的宝宝可能导致体质指数增高。那么,对于喜爱看电视的妈妈来说,这又意味着什么呢?医学研究者最近发现:看电视的时候,一个人的新陈代谢实际上比他在休息的时候要慢。那就意味着你睡觉时比你早起看早间节目能燃烧更多的卡路里。美国育儿专家建议宝宝的前两年时间里最好没有电视。也许妈妈也应该如此。
如果你已经打开了电视,那么转个头,看看你的宝宝,他是如何看电视的。宝宝在看有强节奏感音乐伴奏的节目时,会拍手、蹦跳或者跳舞。换句话说,看电视并不是让你自己懒洋洋地窝在沙发里或者床上,而是把电视当作你保持运动的一种背景,你可以在家里的地板上散步,可以举举哑铃或者做回你的老本行――家务活。
第5招:像宝宝一样喝牛奶
宝宝最喜欢白色饮料了,不管它是配方奶粉、牛奶或者是来自妈妈的母乳,奶类食品可以给宝宝提供充足的钙。同样,妈妈每天也需要补充一定量的钙,尤其是还处在哺乳期的妈妈。但是,妈妈们还是心存疑虑:奶制品能减肥吗?答案是肯定的。
最近的研究已经显示:含钙量丰富的奶制品可以增强机体燃烧脂肪的能力,并加快新陈代谢。美国田纳西州大学教授MICHAELB.ZEMEL博士研究发现:富含奶制品的饮食习惯,再加上适当的运动,可以加快减少体重的过程。ZEMEL博士的其中一项研究表明:经常食用低脂酸奶的人腹部减少的体重是不食用酸奶的人的3倍。
奶制品能减少腹部脂肪的确切原因仍待考证,但ZEMEL博士相信当人体摄入奶制品时,必定会发生某种荷尔蒙反应,导致腹部的脂肪细胞运动。所以,专家建议:当妈妈们一方面担心她们的饮食习惯是否健康,另一方面又担心她们的形体,她们要做的第一件事就是开始每天喝牛奶。
第6招:像宝宝一枯多多运动
尽管宝宝可能只有你膝盖那么点高,但他们会有某些激烈运动,也就是说经常会有短时期的能量暴发,这对手妈妈的减肥计划也有益处。研究表明短时间的激烈运动的效果和在健身房里泡上两个小时的作用是一样的。只要你的心跳达到每分钟40-60下,就意味着你身体的脂肪在燃烧了。除此之外,即使你结束了某种激烈运动,你的身体也会继续燃烧脂肪,这种现象我们称之为后燃烧。
所以,妈妈们,每天都尝试一种新的运动吧。去健身房的时候,可以不断地更换你参力口的项目,从器械到健身操,从健身操到芭蕾,再从芭蕾舞回到器械运动,如此不断的循环往复。当然,运动不仅仅只局限在健身房,带上你的宝宝,推个小车逛超市、商场,空的时候自己跳跃几下都是健康且经济的选择。
一份新出炉的减重调查报告发现,81%的男性受访者自觉减重有助体能表现,其中更有半数以上认为有助提高次数与腰肌力量。 女性受访者则有72%认为减肥有助外在魅力,四成三表示有助次数、三成觉得有助。
一天当中,有N个会要开,哪里有时间安静下来享受美味。
一般中午的时候,我都会在麦当劳、肯德基买个汉堡充饥。晚上,下班都很晚,路上包里随时准备的小零食已经把我喂个半饱。回到家,丰盛的晚餐让我食欲大开。这些天,我发现我的体重明显上涨了,腰部赘肉已经现身了。我是该减肥了。
老公:任珂29岁部门主管老婆差不多,早餐对我来说就是一大杯果汁和一杯黑咖啡就OK了。办公室的抽屉里的糖,饼干随时防止肚子唱空城计。纯净水是我平时主要的饮料。
中午,我几乎都是在写字楼下的餐厅吃点快餐,无非都是米饭炒菜之类的东西,比较油腻。
由于老婆下班比较晚,为了等她共进晚餐,我通常在晚饭前会先吃点饼干或火腿肠,再喝点威士忌,以抚慰我的“五脏庙”。我们的晚餐是比较丰盛的,都是我们爱吃的红烧排骨、水煮牛肉之类的菜。饭后,我俩还会边看电视,边吃点小零食。
常会喝一杯鲜果汁或者豆浆
由于中午时间比较紧张,午餐基本都是在饭馆吃。那里的饭菜比较油腻,好像都是从油里泡出来似的。尽管我知道这对减肥很不利,可美味的诱惑实在太大了。我很喜欢吃水果,也喜欢吃零食,饼干、蜜饯、薯片……来者不拒。
我们俩决定一起减肥。等到目标一达成,我的第一件事,就是把不敢穿的紧身衣服一次买齐,出门秀身材。
这已经养成习惯了。
中午,会去同一家餐馆用餐,吃一些蔬菜、肉类搭配均匀的工作餐。我不太喜欢吃水果。为了自己的健康,我打算减重5公斤。
双人健身一起变瘦
两个人一起健身,给你带来的收获远远超出你的想象!
首先,两个爱侣一起瘦身会让减肥不再是难以坚持的苦差事。两个人可以相互鼓励,相互督促,一方泄气了,动摇了,另一方可以在一旁帮忙打气。其次,有个人在旁边看着,你的错误动作就会无处藏身,避免了很多“无用功”。两人瘦身成功后,上街时的那份良好感觉是不言而喻的。减肥也和休闲一样,两个人总比一个人乐趣多。
3年前,在一个朋友的鼓励下,Natalie 走进了当地的健身房。在美国康乃狄克州斯坦福德的Sportsplex健身俱乐部,她报名参加了超级减肥项目,这是一个8周的密集减肥计划,它包含为会员寻求甩掉赘肉的健康和营养方面的咨询。
Gianesello说:“我很担忧,自己并不是一个积极主动的人,更不是那种一下班就会去健身房的人。”虽然对她来说健身俱乐部中很多事物都是新鲜的,但Gianesello很快就适应了。“在那样的环境中,与志同道合的人一起运动,我感到很舒服,”经过8周的超级减肥项目,她减掉了约14镑,并在项目结束后向更高的目标前进——首先聘请私人教练为她定制一个健康规划,然后报一个训练营课程并在几周内的工作之余完成它。“最终,我从169镑减到129镑,”Gianesello说道,“这不仅仅只是数字问题,我已经迷上了健身!”
兴趣的吸引力
虽然成功减重,但是Gianesello对运动的热诚并没有减少。她的教练提醒她,个性能帮助她更快更好的成为一个健美教练。“我非常感激他的这番话,但我认为他只是在说笑而已。”她说道,“经过另外几次训练后,他让我去教班上的一个学生。然而我发现他是对的:我喜欢当教练。”Gianesello开始为取得证书而奋斗。在此过程中,她学习了如何帮助别人保持健康这类非常宝贵的课程。她说道,“我曾经逃避参加那些集体健身课程,一走进教室,站在那些如电影中走出来的苗条女人旁边,使我完全失去了自信心。”
正在她努力将自己的体形变得更完美时,她突然醒悟:“我意识到无论她们的体形如何,在上课时她们的注意力都完全集中在自己身上,这使我减少了很多压力。”Gianesello也了解到缓慢而稳定的运动效果更佳。那些保持健身的人比刚刚开始的人更强壮,但这需要你投入时间,日复一日的练习,无论你的技巧是否纯熟,都能获得最大的收获。她说,“作为一个教练,我见过各种运动程度的人,每个人都在努力达到自己最好状态。”
他们都有一个共同点:对小小的额外鼓励的感激。“最近,我在等待一个客户展示她的课程,但是她迟到了,”Gianesello说道,“我打电话给她想知道发生了什么,结果她说她在家里,耽搁了。她说,‘你可以过来对我进行测试。我来不了了。’我说,‘不行,我这里的健身球、哑铃和所有的东西,都准备好了。只要来半个小时就可以了。’”客户勉强答应来上了一节30分钟的课程。最终,她非常感激Gianesello坚持的劝说。“她承认,出门运动总比呆在家里吃垃圾食品、自暴自弃好得多。我喜欢这句,‘当然,你可以做到!’”
坚持到底:讽刺的是,虽然她已经是一个持照教练,要保持自己的健身水准却比把它当成一种业余爱好更具困难。Gianesello说“我每天都过得很充实,上午9点我有一个客户,11点又有另外一个。在两个客户之间,我会挤一点时间出来锻炼一下。”她像激励别人一样鼓励自己:花时间欣赏自己手臂的曲线,和跑步锻炼出来的肌肉,这也是她最喜欢的有氧运动。