摘要：目的制备抗Ⅳ型胶原酶单链抗体（scFv），用于构建小型化抗肿瘤抗体靶向药物。方法构建重组表达质粒pET—scFv，并在大肠杆菌进行诱导表达。SDS—PAGE和Western—blot法对表达蛋白进行鉴定，分步透析复性。ELISA法、免疫细胞化学染色法检测scFv对靶抗原和肿瘤细胞的结合活性，明胶酶谱法检测对Ⅳ型胶原酶活性的抑制作用。Boyden Chamber法测定对肿瘤细胞侵袭的影响。动物试验肿瘤模型检测在小鼠体内的抗肿瘤活性。结果表达的单链抗体scFv（3G11）以包涵体的形式存在，经变性和复性后，对抗原IV型胶原酶和肿瘤细胞的免疫反应呈阳性，抗体亲和常数为6×10^7／mol／L。不仅可以抑制HT-29细胞和HT-1080细胞分泌的Ⅳ型胶原酶活性，还可以体外抑制肿瘤细胞的侵袭，抑制程度与浓度呈剂量依赖关系。8CFv（3G11）4mg／kg对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率为49．4％（P〈0．01）。结论scFv（3G11）保留了完整抗体的抗原结合和抑制活性，能够与肿瘤细胞特异性结合，并在小鼠体内有中度抑瘤效果。scFv（3G11）的相对分子质量远小于完整抗体．可作为肿瘤靶向药物的理想载体。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社